الفهرس 
LIST OF CONTENTSOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 118 |  |  |
| | | from | 118 | | |
Abstract
من الجدير بالذكر أن البكتيريا الوتدية هي بكتيريا قيحية شرسة ومزعجة للحيوانات ومربي الماشية. حيث أنها تؤثر على صحة الحيوان بالعدوى المستعصية بالإضافة إلى خسائر مالية لمربي الماشية.
مرض السل الكاذب ، الناجم عن البكتريا الوتدية الكاذبة، هو مرض بكتيري حيواني المنشأ ومعدي على نطاق واسع ينتج عنه أورام حبيبية قيحية ونخر جبني في العقد الليمفاوية (السطحية والحشوية) ويمتد إلى العديد من الأعضاء الداخلية. تسبب البكتريا الوتدية المقيحة حالات عدوى قيحية مختلفة في الحيوانات المستأنسة مثل التهاب الضرع والخراجات والالتهاب الرئوي والتهاب العقد اللمفية.
منذ القدم وحتى الآن، كان الثوم جزءًا من حياة الناس كتوابل للطهي، ومساعد للتطهير، وعامل علاجي ضد الأمراض الشائعة. يحتوي زيت الثوم العطري على جزيئات كيميائية متنوعة لها أنشطة مضادة للميكروبات مثل الإيثرات والبوليفينول والتربين والكيتونات والألدهيدات والكحولات.
ومن ثم، فإن استخدام المستحلب النانوي لزيت الثوم العطري بدلاً من المواد المعدنية النانوية مثل جزيئات الذهب أو الفضة الحيوية كان هو الهدف من هذه الرسالة.
تم تقسيم الدراسة إلى قسمين، في البداية، عزل وتشخيص البكتيريا الوتدية من المجترات و تاثير المستحلب النانوي من زيت الثوم كمضاد للبكتيريا علي العترات المعزولة و التعرف علي خصائص المستحلب النانو باستخدام تفكك الضوء الديناميكي وتحليل كروماتوغرافيا الغاز باستخدام مطياف الكتلة والمجهر الإلكتروني النافذ .
تم جمع مئتان وخمسة عشر عينة من المجترات في محافظتي الغربية والمنوفية بناءً على الآفة القيحية الحبيبية. ويمكن الافتراض أن معظم الإصابات تحدث في التربية الثابتة والمختلطة، خاصة بعد موسم القص. وقد احتلت الأغنام المرتبة الأولى، خاصة بعد القص اليدوي، في الإصابة، خاصة في منطقة الرأس.
ثم التعرف على العينات البكتيرية تقليديًا عن طريق زراعة الصفائح في بيرد باركر، حيث تنمو على شكل مستعمرات صغيرة ذات لون رمادي داكن ومعتمة ثم يتم صبغها بصبغة جرام. تم إجراء الاختبارات البيوكيميائية التقليدية ثم اكتشافها بواسطة نظام فايتك 2 المدمج (بايوميركس، 2006).
يعتمد التحديد الدقيق للبكتريا الوتدية الكاذبة و المقيحة المعزولة بين الحيوانات المريضة بشكل مباشر على استخدام تفاعل البوليمراز المتسلسل المتعدد مثل جينات 16S rRNAوrpo B من بين بكتريا السل الكاذب تم اختبار ثمانية عزلات مختارة لـ 16S rRNAوrpo B وكانت جميعها إيجابية عند 816 وعند 406 نقطة أساس على التوالي.
في الدراسة الحالية، تم تضخيم عزلتين فقط من مرض السل الكاذب بشكل إيجابي لجين pld بينما خفف التحديد الوراثي لجين sig E من التضخيم السلبي للجميع.
سهّل تحليل التسلسل الوراثي الجزيئي لجين 16S rRNA تقييدًا أكثر إحكامًا للجنس الوتدية وتحسين البيانات المظهرية لتحديد الأنواع بشكل موثوق.
تم تسجيل تسلسل 16S rRNA في بنك الجينات وكان له رقم دخول ON899860 تسلسل جزئي وطوله 539 BP (780 BP)، والذي يشبه 31 رقم دخول في بنك الجينات بنسبة 99.49٪ لمرض السل الكاذب.
يحتوي جين rpoB على رقم دخول لجين بيتا، وأقراص مضغوطة جزئية، ودخول ON993360 مع 351 PB للنواة لديه تشابه بنسبة 99.43٪ مع الآخرين في بنك الجينات ورقم وصول الحمض الأميني هو WBD86631 مع 117 حمضًا أمينيًا الأكثر تشابهًا مع شجرة النشوء والتطور. للنويدات والأحماض الأمينية.
تؤكد بياناتنا، المستندة إلى تسلسل rpoB لهذه البكتيريا، أن هذا الجين متعدد الأشكال مهم مثل جين 16S rRNA ، ونقترح استخدامه لاستبدال أو استكمال جين 16S rRNA في الدراسات التطورية لمرض السل الكاذب.
تم اختبار العزلات الأربعة للبكتريا الوتدية المقيحة لجينات 16S rRNA و rpoB وكانت جميعها إيجابية عند 816 نقطة أساس وعند 406 نقطة أساس على التوالي. أثناء اختبارهم لجين pld، كان غائبًا فيهم جميعًا.
أظهرت جميع العزلات عوامل الضراوة المظهرية مثل الهيموليزين وأنزيم الليباز مع الكازيناز ونشاط الليسيثيناز. كان لغالبية السلالات التي تم اختبارها قابلية تكوين الأغشية الحيوية مع وجود اختلافات في طريقة أجار الكونغو الأحمر وطريقة الأنبوب.
أوضح اختبار الحد الأدني للتركيز لحساسية المضادة للميكروبات الحساسية للليفوفلوكساسين بينما المقاومة للجسيمات النانوية للزنك أوكسيد والعكبر المصري على النقيض من أن نفس التركيز لجسيمات الزنك أوكسيد النانوية والعكبر المصري يمنع تكوين الأغشية الحيوية.
حتى الآن، تم استخدام الثوم كمكون غذائي لخصائصه المفيدة وتقاربه المضاد للميكروبات. تم استخدام زيت الثوم الأساسي في العلاج والوقاية من العديد من الأمراض بسبب أنشطته المضادة للميكروبات ومضادات الأكسدة والمبيدات الحشرية. بالإضافة إلى ذلك، يمكن تسريع فعاليتها بشكل واضح من خلال استغلال إمكاناتها على نطاق النانو بجرعة دنيا مع التغليف بواسطة المستحلب.
نظرًا للدور المحوري الذي يلعبه الثوم، فقد أردنا تجربة المستحلب النانوي لزيت الثوم مع سلالاتنا لاكتشاف قوة فعاليته. تم تحضيره من زيت الثوم، توين 80، والماء منزوع الأيونات ثم تم اختباره للخصائص الفيزيائية والكيميائية ومقايسة السمية الخلوية.
وقد تم وصفه بأنه كروي الشكل، بمتوسط حجم 118 نانومتر بواسطة المجهر الإلكتروني النافذ مع توزيع ضيق الحجم يشير إلى تجانس أكبر في حجم القطرات النانوية. كان جهد زيتا 13.2 مللي فولت، مشحونًا سالبًا مع قطبية أوتوماتيكية وموصلية تبلغ 89 US/cm. علاوة على ذلك، كان المستحلب الخاص بنا آمنًا للاستخدام حيث كان تركيز IC50 فيه 1.69 ميكروغرام/مل.
توضح البيانات الناتجة من تحليل كروماتوغرافيا الغاز باستخدام مطياف الكتلة أن الأحماض الدهنية كانت المكونات الرئيسية له. وكانت الأحماض الدهنية القصوى التي تم تحديدها في المستحلب هي حمض الأوليك، وحمض دهني، وحمض ميريستيك. في حين أنها توفر إنتاجية نفطية عالية حيث تم العثور على العديد من المكونات نسبة إلى زيت السيليكون ومكونات أخرى نسبة إلى البنزين. تم العثور على مركبات نشطة أخرى أيضًا مثل Cyclooctasiloxane، hexadecamethyl-، Dotriacontane، 9،12 octadecadienoic acid (z،z)-، 2،3-bis[(trimethylsilyl)oxy]propyl ester.
علاوة على ذلك، تم تحديد اختبار حساسية التخفيف الجزئي للمستحلب النانوي لزيت الثوم باستخدام المقياس المحسوب لقيمة الحد الأدني للتركيز للنشاط الأيضي البكتيري. كانت قيم الحد الأدني للتركيزات القاتلة للجراثيم 1:6 (3.125) و1:3(25) ضد عزلات للبكتريا الوتدية الكاذبة و المقيحة على التوالي.
تم التقاط صور المجهر الإلكتروني النافذ للتحكم والعزلات المعالجة لتوضيح النشاط المضاد للبكتيريا لمستحلب زيت الثوم النانوي 2٪. وكشف شكل الخلايا غير المعالجة، كما لوحظ، أنها بكتيريا عصيات المكورات سليمة.
فقد تأثرت العزلات المعالجة بمستحلب زيت الثوم النانوي 2% تأثيرات ضارة تتلخص في التغيرات الهيكلية في جدار الخلية مع وجود مجموعات على السطح، ضعف طبقة البيبتيدوغليكان وتسرب السيتوبلازم، وتحلل جدار الخلية، واستيعاب الجسيمات النانوية في الخلية البكتيرية ومن ثم تحلل الخلايا ذاتيا.
يعتبر استخدام مستحلب النانو لزيت الثوم طريقة جديدة كعامل مضاد للميكروبات لعلاج أنواع مختلفة من العدوى البكتيرية الوتدية.