الفهرس 
IntroductionOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 109 |  |  |
| | | from | 109 | | |
Abstract
هدفت الدراسة إلى معرفة معدل انتشار المسببات المرضية المنقولة من خلال الالبان سواء كان لبن خام او معامل حراريا والتعرف عليها من خلال استخدام الطرق التقليدية والطرق الحديثة وقد تم استهداف ميكروب E.coli o157:H7 و Salmonella sp.
وذلك من خلال اتباع ما يلي:-
1-تم تجميع 100 عينة من اللبن الخام تم تجميعها من محلات بيع الألبان والباعة الجائلين و30 من اللبن المعامل حراريا (المبستر – المعقم) من المحافظات المختلفة بمصر.
2-تم اتباع الطرق التقليدية في التعرف علي وجود E.coli o157:H7 و Salmonella sp. من خلال إستخدام بيئات إنتخابية متخصصة لهذين الميكروبين.
3-تم اجراء بعض الاختبارات البيوكيميائية وتم اجراء صبغ جرام للتاكد من الميكروبات التي ظهرت على البيئات المتخصصة (XLD,HE and SMAC).
4-تم اختبار حساسية العزلات لبعض المضادات الحيوية (Chloramphenicol (C30) 30μg, Amoxicillin/clavulanic acid (AMC 30) 20/10μg, Erythromycin (E15) 15μg, Cephalexin (CL30) 30μg).
5-تم استخدام الطرق التي تعتمد على الحمض النووي من خلال إستخلاص الحمض النووى الكلي (Genomic DNA) من العزلات النقية.
6-تم التعرف على جينات السمية (invA, sifA,iroN, spiA, orgA and spvA) في العزلات من خلال conventional PCR وMultiplex PCR .
7-تم تطبيق تكنيك Amplified Ribosomal DNA Restriction Analysis علي العزلات.
8-تم استخدام نتائج تفاعل البلمرة المتسلسل ل16sRNA لمعرفة التتابعات الخاص به ثم تحليل نواتج عملية السلسلة (sequencing) باستخدام ادوات المعلوماتية الحيوية لمعرفه الوضع التقسيمى للعزلة وتسجيلها فى بنك الجينات التابع لقواعد البيانات NCBI.
9-تم اجراء تجربة لمحاكاة ما يحدث بالالبان عند وجود عدوي بالسالمونيلا بها ومعرفة مدي حساسية qrt-PCR للكشف عن السالمونيلا بعد مرور 12 و 24 و36 ساعة. وكانت اهم النتائج المتحصل عليها كما يلى:
أسفرت النتائج عن تواجد بكتريا السالمونيلا في العينات المفحوصة بنسبة 9% في اللبن الخام ولم يتم عزل السالمونيلا من اللبن المعامل حراريا. کما أوضحت الدراسة أنه لم يتم عزل ميكروب الإيشيريشيا کولاي O157:H7 من کل من اللبن الخام والمعامل حراريا وقد أظهرت العزلات ايجابية لاختبارات السترات والكتاليز و احمر الميثيل بينما كانت سلبية فى اختبارات الاندول والاوكسيديز و Voges-Proskauerوعند اختبار العزلات تحت اليكروسكوب اظهرت انها سالبة لجرام ولها شكل عصوي ولون وردي.
كما انه عند الكشف عن جينات السمية أظهرت العزلات انها كلها تمتلك هذه الجينات (invA, sifA,iroN, spiA, orgA and spvA) وعند استخدام تكنيك ARDRA اظهر انه جميع العزلات تنمي لنفس الجنس والنوع.
كما ان النتائج المتحصل عليها من تتابع جين 16SrRNAتم تحليل نواتجها باستخدام ادوات المعلوماتية الحيوية وتسجيلها فى بنك الجينات التابع لقواعد البيانات NCBI واخدت ارقام .(OR048345 and OR102504)
كما ان qrt-PCR لم يتمكن من الكشف عن السالمونيلا بعد مرور 12 ساعة ولكن تمكن من الكشف عنها بعد مرور 24 و36 ساعة.
وتوصي هذة الرسالة بما يأتي :-
oوجود تأثير ضار على الصحة العامة من إستهلاك اللبن الخام
o يجب اتباع الطرق الجزيئية للكشف السريع والمبكر عن الميكروبات المرضية
o اتباع الارشادات الصحية عند اجراء عملية الحلب للحد من انتقال الميكروبات الي اللبن الخام .
oاستخدام جهاز تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي في الكشف السريع عن وجود الميكروبات المرضية.