الفهرس 
EquipmentOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 316 |  |  |
| | | from | 316 | | |
Abstract
يحدث إلتهاب الأذن الوسطى نتيجة التهاب وعدوى في الأذن الوسطى، و يعتبر أكثر شيوًعا في الرضع والأطفال. ويؤدي هذا المرض إلى تكوين سائل إلتهابي في الأذن الوسطى وحمى وألم خلال المراحل المبكرة من التهاب الأذن الوسطى. ترتبط الفيزيولوجيا المرضية لإلتهاب الأذن بشكل أساسي بالعدوى الممرضة المعدية في الأذن الوسطى، والتي تبدأ في البلعوم الفمي و البلعوم الأنفي .و أكثر أنواع البكتيريا شيوعًا المسببة لإلتهاب الأذن (Streptococcus pneumoniae) العقدية الرئوية (SP) ,(Haemophilus influenzae) المستدمية النزلية (Hi) و الموراكسيلا النزلية Moraxella catarrhalis. عادةً ما يكون التهاب الأذن الوسطى الحاد مرضًا يشفى ذاتيًا، ولكن العدوى المتكررة في نسبة صغيرة من الأشخاص قد تتطور إلى التهاب الأذن الوسطى المزمن وهي حالة يمكن أن تؤدي إلى جعل المرض أكثر خطورة. على سبيل المثال ، قد يحدث فقدان السمع غير القابل للشفاء وتدمير السلسلة العظمية مما قد يؤدي إلى النوبات المستمرة من التهاب الأذن الوسطى الحاد. وبناءً عليه ، تم استخدام العديد من الخيارات العلاجية لعلاج هذه الأمراض بما في ذلك المضادات الحيوية ، والستيرويدات ، ومضادات الفطريات ، والمسكنات الفموية ، والتخدير الموضعي. من بين تلك الأساليب العلاجية، تم استخدام الستيرويدات الأذنية في الدراسات الحديثة وتعتبر علاجات واعدة للغاية.
من بين هذه الستيرويدات، يعتبر عقارالتريامسينولون أسيتونيد فعالا في علاج التهاب الأذن الوسطى. تريامسينولون أسيتونيد هو جلايكورتيكود اصطناعي حيوي، له تأثير مضاد للالتهابات، ومضاد للحساسية، ومضاد للندبات ومحفز للمناعة ويستخدم على نطاق واسع كعلاج منخفض التكلفة وفعال.
يعتبر التريامسينولون أسيتونيد مشتقًا أكثر فعالية من التريامسينولون. يمكن أن يرتبط بمستقبلات الجلوكوكورتيكويد بشكل أكثر إحكامًا من التريامسينولون، يقلل هذا الارتباط من إنتاج الوسائط الالتهابية مع زيادة تنشيط البروتينات المضادة للالتهابات مثل ليبوكورتين. تم العثور على مستقلب التريامسينولون أسيتونيد ليكون له نصف عمر طويل ونفاذية عالية عبر الحاجز الغشائي. تشتمل تركيبات التريامسينولون أسيتونيد المتاحة تجاريًا على المراهم والمستحضرات والحقن، ويختلف تطبيقها وفقًا لحالة المريض.
تم تصميم العديد من أنظمة التوصيل، بما في ذلك الجسيمات النانووية والحبيبات النانووية لتعزيز توصيل الدواء إلى الأذن الوسطى، بحيث تكون قادرة على المرور بسهولة عبر غشاء الطبلة السليم، عن طريق الأستخدام الموضعي في الأذن. من بين هذه الأنظمة ذات الحجم النانوي، الجليسيروزومات هى عبارة عن حويصلات تتكون من خليط من الدهون فوسفاتية والجلسرين والماء التي تم تطويرها كناقلات أدوية جديدة واعدة لتوصيل الأدوية إلى العضو المستهدف عن طريق توصيل الأدوية عن طريق الجلد. وتعد الجلسروسبانلاستيك أنظمة حويصلية واعدة تم أختراعها حديثا يتم إضافة الجلسرين في الجزء المائي من السبانلاسيتك. وبالتالي، يمكن أن يدمج مزايا نظام النانوسبانلاستك مع فوائد الجلسرين في توصيل الأذن.
الهدف من العمل في هذه الرسالة هو استكشاف قابلية تطبيق الحبيبات النانووية الجديدة المحملة بتريامسينولون أسيتونيد من أجل توصيل الدواء عبر طبلة الأذن عن طريق الأستخدام الموضعي في الأذن،Sللتغلب على المشاكل المرتبطة بضعف ذوبان الدواء في الماء والتحقيق لأول مرة في فعاليته في علاج التهاب الأذن الوسطى.
ولتحقيق هذا الهدف ، تم تقسيم العمل في هذه الرسالة إلى ثلاثة فصول:
• الفصل الأول: تحضير وتوصيف الجلسروزومات التي تحتوي على عقار تريامسينولون الأسيتونيد.
• الفصل الثاني: تحضير وتوصيف الجلسروسبانلاستيكس التي تحتوي على عقار تريامسينولون الأسيتونيد.
• الفصل الثالث: دراسات حيوية لتقييم الحويصلات النانووية المحسنة في علاج إلتهاب الأذن الوسطى.
الفصل الأول: تحضير وتوصيف الجلسروزومات التي تحتوي على عقار تريامسينولون الأسيتونيد
يتناول هذا الفصل صياغة وتوصيف الجلسيروسومات التي تحتوي على عقار تريامسينولون الأسيتونيد. تم تحضير الجلسروزومات المقترحة بطريقة حقن الإيثانول. تم تنفيذ تحسين الصيغ باستخدام التصميم D-optimal design. كانت العوامل المعتمدة المدروسة هي تركيز فوسفاتيديل كولين ، وتركيز الجلسرين ، ونسبة كوليستيرول: فوسفاتيديل كولين ، ونسبة الدواء (فيما يتعلق بكمية فوسفاتيديل كولين) ، بهدف التحقق من تأثيرها على العديد من الاستجابات ؛ حجم الجسيمات ، مؤشرات التشتت ، جهد زيتا ونسبة حوصلة الدواء داخل الناقلات. تم دراسة معدل ثبات الصياغات المختارة بعد تخزينها لمدة ستة أشهر وفحص الميكرسكوبي الألكتروني و اجراء دراسة المسح التفاضلى الحرارى واللزوجة ونفاذية و ترسب الدواء عبر غشاء طبلة أذن الأرنب المستأصل.
وكشفت نتائج هذا العمل عن ما يلي:
• تم تحضيرخمسة وعشرون صيغة للجلسيروزوم بنجاح من أجل التحسين من خلال التصميم الإحصائي الأمثل (D-optimal design) باستخدام طريقة حقن الإيثانول.
• تراوح حجم الناقلات النانووية من 92.68 إلى 205.6 نانومتر اعتمادا على تركيز فوسفاتيديل كولين ونسبة الجلسرين.
• أظهرت كل الحويصلات التى تم تحضيرها شحنات سالبة تتراوح من 3.89- الى 20.01- mV.
• تراوحت نسبة حوصلة الدواء داخل الناقلات من 47.60 إلى 94.33 %، اعتمادا على جميع العوامل الفردية.
• تتكون تركيبة الجلسرين المحسّنة (F-1-V) من 2٪ من تركيز فوسفاتيديل كولين، و 20٪ جلسرين، و 0.5 نسبة كوليستيرول: فوسفاتيديل كولين ، و 10.014٪ نسبة دواء فيما يتعلق بكمية الفوسفاتيديل كولين ، و أظهر حجم الجسيمات106.1 ± 2.82 نانومتر مؤشرات التشتت0.119 ± 0.04 وجهد زيتا-12.06 ± 5.99 mV ونسبة حوصلة الدواء80.62 ± 4.41٪.
• أظهرت صيغة الجلسيروزوم المختارة (F-1-V) خصائص تخزين جيدة كما يتضح من التغيرات طفيفة فى حجم الجسيمات، ومؤشر التشتت، وقيم الشحنات التي على الناقلات و نسبة حوصلة الدواء داخل الناقلات.
• تم فحص الناقلات تحت المجهر الإلكتروني وكانت كروية موحدة الشكل مع سطح أملس.
• كشفت المخططات الحرارية للمسح التفاضلى الحراري عن اختفاء ذروة الذوبان الماص للحرارة للتريامسينولون أسيتونيد في لجليسيروزومات المحملة مما يشير إلى الذوبان الكامل للدواء داخل مصفوفة الدهون للأنظمة النانووية المنتجة.
• انخفضت قيم لزوجة الجليسيروزومات بشكل كبير مع زيادة معدل القص، مما أدى إلى سلوك ترقق القص، ويشير إلى تدفق غير نيوتوني.
• أظهر التريامسينالون أسيتونيد نفاذية عالية من الجلسيروزومات المختارة من خلال غشاء طبلة الأرنب المستأصل بعد 24 ساعة مقارنةً بالدواء المعلق؛ (128.71 ± 15.10 ميكروغرام / سم2 و 51.41 ± 1.93 ميكروغرام / سم2). وفقًا لذلك، أسفرت الجليسيروزومات عن أعلى قيم للتدفق وللKP 22.95 ± 6.55) ميكروغرام / سم 2 / ساعة و 11.47x10-3 ± 3.27x10-3 سم / ساعة( من تلك التي تم الحصول عليها من الدواء المعلق ( 2.88 ± 0.22 ميكروغرام / سم 2 / ساعة( ، 1.44x10-3 ± 0.1x10-3 سم / ساعة ، على التوالي). بالنسبة لقيم ER المحسوبة، أظهرت الجلسيروزومات زيادة تقارب 8 أضعاف في تغلغل TA بالنسبة للمعلق المقابل.
• كشفت نتائج ترسيب الدواء عن مدى أعلى لترسب الجلسيروزومات في الغشاء الطبلي ( ± 27.15 5.53 ميكروغرام / سم 2) مقارنة بالدواء المعلق6.43 ± 0.819 ميكروغرام / سم 2
الفصل الثاني: تحضير وتوصيف الجلسروسبانلاستيكس التي تحتوي على عقار تريامسينولون الأسيتونيد
كان العمل في هذا الفصل معنيا بإعداد وتوصيف الحويصلات النانووية التي اخترعناها حديثًا، ما يسمى الجلسروسبانلاستيكس. تم تحضير الجلسروسبانلاستيك باستخدام طريقة حقن الإيثانول. تم تنفيذ تحسين النظام المقترح باستخدام التصميم المركب المركزيCentral Composite Design (CCD).. كانت العوامل المعتمدة المدروسة هي تركيز الجلسرين، ونسبة الكتلة سبان: عامل سطحى نشط محب للماء ، وكمية الدواء ونوع العامل السطحى النشط المحب للماء. بهدف التحقيق في آثارها على العديد من الاستجابات: حجم الجسيمات ومؤشرات التشتت وجهد الزيتا ونسبة حوصلة الدواء داخل الناقلات. تم دراسة معدل ثبات الصياغات المختارة بعد تخزينها لمدة ستة أشهر وفحص الميكروسكوبي الإلكتروني واجراء دراسة المسح التفاضلي الحراري واللزوجة، تم أيضًا إجراء اختبار نفاذية وترسيب من خلال غشاء طبلة الأرانب المستأصلة على الصيغ المحسّنة.
وكشفت نتائج هذا العمل عن ما يلي:
• تم إعداد الجلسروسبانلاستيك بنجاح باستخدام طريقة حقن الإيثانول.
• تم إجراء التحسين الجلسروسبانلاستيك بواسطة CCD من خلال تحضير أربعة وثلاثين صيغة.
• تراوح حجم الناقلات النانوني من 225.2 إلى 1134 نانومتر اعتمادا على محتوى الجلسرين ونسبة كتلة سبان: عامل سطحى نشط محب للماء.
• كانت جميع تركيبات الجلسروسبانلاستيكس المحضرة سالبة الشحنة، مع قيم محتملة لزيتا تتراوح من -30.9 إلى -47.7mV .
• تراوحت نسبة حوصلة الدواء داخل ناقلات الجلسروسبانلاستيكس من 40.4٪ إلى 95.59٪.
• أظهرت صيغ الجلسروسبانلاستيكس المختارة (F-1-O &F-2-O) خصائص تخزين جيدة كما يتضح من التغيرات طفيفة فى حجم الجسيمات، ومؤشر التشتت، وقيم الشحنات التى على الناقلات و نسبة حوصلة الدواء داخل الناقلات خلال فترة التخزين البالغة 6 أشهر.
• أظهرت صور المجهر الإلكتروني شكلا كرويا مع سطح أملس .
• أظهرت المخططات الحرارية للمسح التفاضلى الحرارى أن ذروة الذوبان الماص للحرارة للتريامسينالون أسيتونيد قد اختفت في جميع الجلسروسبانلاستيكس المحملة، مما يشير إلى أن الدواء قد تم إذابته بالكامل داخل مصفوفة الدهون في الحويصلات.
• انخفضت قيم اللزوجة الجلسروسبانلاستيك مع زيادة معدل القص، مما يشير إلى ترقق القص غير النيوتوني
• أظهرت الصيغة المُحسَّنة من الجلسروسبانلاستيكسF-1-O كمية تراكمية أعلى بكثير من نفاذية الدواء ( 188.46 ±15.92ميكروغرام / سم2) من تلك الموجودة في F-2-O (113.38 ± 6.63 ميكروغرام / سم 2) و الدواء المعلق ( 51.41 ± 1.93ميكروغرام /سم 2) بعد 24 ساعة. علاوة على ذلك ، لوحظ تحسن كبير في تدفق TA (Jss) من كلا الصيغتين المحسنة ؛ F-1-O (28.74 ± 1.40ميكروغرام / سم 2 / ساعة) و F-2-O ( 4.69 ± 0.42 ميكروغرام / سم 2 / ساعة) مقارنة بالدواء المعلق ( 2.88 ± 0.22ميكروغرام/سم 2 / ساعة) ، مع نسب تعزيز تبلغ 9.86 و 1.62 على التوالي. نتيجة لذلك ، أسفرت الجلسروسبانلاستيكسF-1-O و F-2-O عن قيم KP أعلى (14.21x10-3 ± 1.96x10-3سم / ساعة ، 2.34x10-3 ± 0.21x10-3 سم / ساعة ، على التوالي) من تلك التي تم الحصول عليها الدواء المعلق ( 1.44x10-3 ± 0.1x10-3سم / ساعة).
• أظهرت تركيبة الجلسروسبانلاستيك (F-1-O) خصائص مقبولة ، مع ترسب مناسب وإمكانات نفاذية أعلى مقارنة بالصيغة (F-2-O) ونتيجة لذلك، تم اختيارهم لمزيد من الدراسات الحيوية.
الفصل الثالث: دراسات حيوية لتقييم الحويصلات النانووية المحسنة في علاج إلتهاب الأذن الوسطى
في هذا الفصل، تم التحقق من كفاءة الجلسيروسوم (F-1-V) و الجلسروسبانلاستيك (F-1-O) المحملين بتريامسينولون الأسيتونيد، في علاج التهاب الأذن الوسطى ومقارنتها بالعقار المتواجد في السوق. أجريت الدراسة الديناميكية الدوائية الحيوية على خمس مجموعات من الفئران البيضاء (خمسة فئران في كل مجموعة) والتي تم تحفيز التهاب الأذن الوسطى عليها بواسطة الليبوبولى سكاريد (LPS). تم إعطاء الصيغ يوميا من خلال التطبيق الموضعي لمدة 14 يوما. تم أيضًا فحص مدى تحمل وسلامة الجلسيروزومات والجلسروسبانلاستيكس المحمل بـالتريامسينالون أسيتونيد في الحيوانات غير المستحثة بالتهاب الأذن الوسطى. تم إجراء تقييم مجموعات العلاج أو السلامة من خلال فحوصات الأنسجة والمقايسات البيوكيميائية بما في ذلك قياسات تركيزات إنترلوكين 1β (IL-1β) وعامل نخر الورم α (TNF-α) في متجانسات الأذن
وكشفت نتائج هذا العمل عن ما يلي:
• أظهرت نتائج الفحص النسيجي المرضي من الدراسة الديناميكية الدوائية الحيوية أن الجلسروسبانلاستيك (F-1-O) كانت أكثر فعالية من الجليسيروزوم (F-1-V)، حيث تم الكشف عن تقشر خفيف في الغشاء المخاطي للتجويف الطبلي في مجموعة الفئران المعالجة بصيغة (F-1-V). بينما أظهرت مجموعة الفئران المعالجة بـ (F-1-O) الغشاء المخاطي الطبلي الطبيعي وتحت المخاطية مع الغدد الدهنية في التجويف والغشاء.
• بالمقارنة بمعلق الدواء التجاري ومجموعات التحكم الإيجابية، كانت الصيغة الجلسروسبانلاستيك تحتوي على أدنى قيم للالتهابات (TNF-α و IL-1β) تليها صيغة الجلسروزوم.
• في اختبارات السلامة الحيوية التي أُجريت على الحيوانات الطبيعية التي تم إعطاؤها كل من الصيغ المحسنة، أظهر الفحص النسيجي والتحليل الكيميائي الحيوي عدم وجود تغييرات مرضية محددة أو تلف الأنسجة في أنسجة أذن الفئران ، فضلاً عن عدم إنتاج السيتوكينات المسببة للالتهابات ، مما يؤكد تحمل جزيئات نانووية مختارة في الجسم الحي.
أدى تحميل التريامسينالون أسيتونيد إما في الجليسيروزومات أو الجلسروسبانلاستيك إلى تعزيز إمكاناته العلاجية في مرض التهاب الأذن الوسطى مقارنة بمعلق الدواء التجاري ، مع تفوق الجلسروسبانلاستيكس على الجليسيروزومات.