Search In this Thesis
   Search In this Thesis  
العنوان
Real-time PCR detection of Phytophthora spp. in some horticultural crops and study of the fungus biodiversity in Egypt /
المؤلف
Tolba, Shimaa Rashad Tawfik.
هيئة الاعداد
باحث / شيماء رشاد توفيق طلبه
مشرف / ابراهيم ابراتهيم سليمان الشواف
مشرف / اوريليو سنسيا
مناقش / محمود مختار عبد القادر
الموضوع
Fungi Genetics. Fungi genetics Laboratory Manuals.
تاريخ النشر
2018.
عدد الصفحات
107 p. :
اللغة
الإنجليزية
الدرجة
ماجستير
التخصص
العلوم الزراعية والبيولوجية
تاريخ الإجازة
1/1/2018
مكان الإجازة
جامعة بنها - كلية الهندسة بشبرا - الوراثة والهندسةا لوراثية
الفهرس
Only 14 pages are availabe for public view

from 107

from 107

Abstract

يحتوي جنس الفيتوفثورا علي العديد من المسببات المرضية النباتية التي تسبب خسارة كبيرة في المحاصيل الغذائية .يعتبر فطر فيتوفثورا انفستانس هو المسبب الرئيسي لمرض اللفحة المتأخرة في البطاطس والطماطم. دورة حياة الفطر سريعة وتدمر المحصول في أيام قليلة اذا توفرت الظروف المناسبة للنمو(درجة الحرارة المثلي-الرطوبة) في هذه الدراسة جمعت 49 عينة (نباتية - تربة) من بعض حقول الطماطم والبطاطس والفلفل في منطقة الدلتا المصرية بمحافظات: المنوفية ، القليوبية ، الجيزة وعلي فترات زمنية مختلفة ابتداءا من سبتمبر 2016 وحتي مايو 2017 وايضا جمعت عشرة عينات ايطالية من احد صوب الطماطم الواقعة في مدينة Carovigno بايطاليا في الخامس عشر من مايو 2017 حيث عرفت العزلات المصرية والايطالية باستخدام بادئات متخصصة وعامة لمناطق ITS لانواع فيتوفثورا انفستانز وانواع فيتوفثورا الاخري. حيث اظهرت نتائج الفحص للعشائر المصرية والايطالية عن طريق تحليل تفاعل البلمرة الكمي Real time PCR assays وذلك باستخدام مجس ال (MB avr3a probe) حيث وجد أن التركيب الوراثي avr3a/avr3a كان أكثر انتشارا في عشائر الطماطم الايطالية عن المصرية.
وبعد اختيار الظروف المثلي للمجس تمكن من تحديد سلالة فيتوفثورا انفستانس الضارية من التربة المصرية (عينات طماطم بمحافظة المنوفية) كما تمكن من تحديد سلالة فيتوفثورا برازيتيكا من العينات الايطالية. في هذه الدراسة , تم الاستفادة من العينات لكلاً من التربة والنباتات الممرضة المعدية والنباتات المعدية في عزل ال Bulk Genomic DNA من (فلورا التربة,الطماطم ,البطاطس) للتعرف علي أنواع فطر الفيتوفثورا المختلفة. كما تم استخدام بادئاتO8-3 Forward, O8-4 Reverse) ) المتخصصة في مضاعفة منطقة الITS region لفطر فيتوفثورا انفستنس. ويعد هذا الاتجاه مميزا في تقليل الوقت والتكلفة و قدرته علي التنبؤ والتشخيص السريع للأمراض مقارنة بالطرق التقليدية. من ناحية أخري ,تم في تجربة العدوي الصناعية جمع العينات علي فترات زمنية(يومين-أربعة أيام- سبعة أيام) بعد العدوي وتم عمل ثلاثة مكررات لكل معاملة. تم استخدام جينات Pal 5,Pr 1,Pin 11 and Lox D)) كجينات دفاعية أو مناعية واستخدام جينAct)) كجين مرجعي لاجراء المعايرة. أظهر جين Pin II أعلي تعبير جيني في معاملة الكنترول مقارنة بالمعاملات الأخري وبصفة عامة ولكنه أظهر أقل تعبير جيني بعد أربعة أيام من العدوي مقارنة بيومين وسبعة أيام وذلك في معاملة الكنترول. في حين أنه أظهر أعلي تعبير جيني في معاملة الفيتوفثورا بعد أربعة أيام مقارنة (بيومين – سبعة أيام) , كما لوحظ أعلي تعبير جيني لجين Pin IIفي معاملة كل من البيكونيا فقط والبيكونيا والفيتوفثورا معا وذلك بعد سبعة أيام مقارنة(بيومين – أربعة أيام). أظهر جين Pal 5 أعلي مستوي تعبير جيني للmRNA في معملة البيكونيا بينما وجد أقل تعبير جيني في معاملة الكنترول, بالإضافة إلي أن كل من معاملات الفيتوفثورا فقط والفيتوفثورا والبيكونيا معا استعرضت تعبير جيني متو سط علي مستوي الmRNA وذلك بعد أربعة أيام من العدوي مقارنة (بيومين – سبعة أيام). تم تنشيط التعبير الجيني لجين Pal 5 أنه تم تنشيطه عن طريق العدوي الفطرية. أظهر جين Lox D أعلي تعبير جيني بعد سبعة أيام من العدوي وخصوصا في معاملة البيكونيا والفيتوفثورا معا علي عكس انه أظهر أقل تعبير في حالة معاملة البيكونيا.كما لوحظ قلة التعبير الجيني في حالة معاملة الكنترول عن معاملة البيكونيا والفيتوفثورا معا,أشار ذلك بأنه تم زيادة التعبير الجيني لجين Lox D من خلال خلط فطرين مختلفين لإجراء العدوي(فيتوفثورا انفستانس –بيكونيا كلاميدوسبوريا) , بالإضافة إلي زيادة طفيفة لنشاط جين Lox D بعد سبعة أيام من العدوي في معاملة الفيتوفثورا بمفرده.