الفهرس 
IntroductionOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 149 |  |  |
| | | from | 149 | | |
Abstract
يعتبر إلتهاب الضرع من أكثر الأمراض تعقيدا و ذلك لأنة يسببه كثيرمن الميكروبات التى تختلف من حيث قدرتها لأحداث إلتهاب الضرع و يعد الاكثر خطورة هو التهاب الضرع الخفى (التحت إكلينيكى ) وذلك لارتفاع نسبة حدوثة.لذلك تهدف هذه الدراسة إلى التعريف الظاهرى و الجينى لفصائل الاستافيلوكوكاس و ميكروبات الكوليفورم المعزولة من الأغنام والماعز المصابة بإلتهاب الضرع الخفى و ذلك عن طريق الكشف عن بعض جينات الضراوة و جينات المقاومة للمضادات الحيوية للعترات عن طريق استخدام تفاعل انزيم البلمرة المتسلسل.واجراء اختبار التتابع النيوكليوتيدي لجين tuf لتأكيد التعرف على بعض العترات محل الدراسة.ولتحقيق هذا الهدف تم اجراء هذه الدراسة على عدد (135) حيوان سليم ظاهريا من مختلف المناطق بمحافظتى الشرقية والقليوبية بحيث تشمل (63) أغنام و (72) ماعز وقد تم تجميع عدد مائتى عينة لبن منهم (91)عينه من انصاف الضرع للاغنام و(109) عينه من انصاف الضرع للماعز لتحديد اصابتها بإلتهاب الضرع التحت إكلينيكى (الخفى) بأستخدام اختبار كاليفورنيا.تم تحديد الاصابه بالتهاب الضرع التحت اكلينكى (الخفى ) من الاغنام وسجلت نسبه الاصابه 38.1 %بينما كان معدل اصابه انصاف الضرع فى الأغنام التى تم فحصة هو 42.8 %.وكذلك كان معدل الاصابه بالتهاب الضرع التحت اكلينكى فى الماعز 47.2 % بينما كان معدل اصابه انصاف الضرع فى الماعز المفحوص هو 50.4 % بالنسبة إلى نتائج الفحص البكتريولوجي في عينات الأغنام وجد ان اجمالي عدد المعزولات البكتيرية (23) بنسبة (25.3%) من اجمالي 91 عينة لبن. حيث تم عزل عدد (18( معزولة منهم فى صورة منفردة بينما وجد خمس منهم فى صورة اصابات مختلطة.بينما بالنظر إلى نتائج الفحص البكتريولوجي في 109 عينة لبن معزولة من الماعز وجد ان اجمالي عدد العترات البكتيرية (38) بنسبة (%34.9). حيث تم عزل عدد(29( عترة منهم فى صورة منفردة بينما وجد منهم 9 فى صورة اصابات مختلطة .وبالفحص المعملي التقليدى لعدد 61عترة بكتريية ( 23عترة بكتريية من الأغنام و 38 عترة بكتريية من الماعز) وجد ان هناك اصابات فردية واخرى مشتركة فى حالات التهاب الضرع الخفى والتى تم ترتيبها طبقا لمعدل العزل فى حالات الاغنام و الماعز كالتالى :1. الاستافيلوكوكاس سالبة التلزن: بنسبة 43.5%من الاغنام و 50% من الماعز. الايشيريشيا كولاى: بنسبة 13.1% من الاغنام و18.4 % من الماعز.3 المكور العنقودى الذهبى( ستافيلوكوكاس اورياس): بنسبة 8.7% من الاغنام و 2.6% من الماعز.4 الكليبسيلا: بنسبة 8.7 % من الاغنام ولم تعزل من الماعز.5.الانتيروبكتر: لم تعزل من الاغنام و عزلت بنسبة 5.3% من الماعز.6. الانتيروكوكاس فيكاليز : بنسبة 4.3 % من الاغنام و لم يتم عزلة من الماعز.7.الاستافيلوكوكاس سالبة التلزن+ الايشيريشيا كولاى : بنسبة 4.3 % من الاغنام و5.3% من الماعز.8.الاستافيلوكوكاس كروموجينز موجبة التلزن+ الايشيريشيا كولاى : بنسبة 4.3% من الاغنام و لم تعزل من الماعز.9.الاستافيلوكوكاس سالبة التلزن+ الكليبسيلا: بنسبة 8.7 % من الاغنام و2.6% من الماعز.10. الاستافيلوكوكاس سالبة التلزن+ الانتيروبكتر: بنسبة 4.3 % من الاغنام و2.6% من الماعز.11. الانتيروكوكاس كاسليفلافس+الاشيرشياكولاى: لم تعزل من الاغنام ووجدت بنسبة 7.9% من الماعز.12.الكوكاى بكتريا موجبة الجرام و الغير معرفة+ الاشيرشياكولاى:لم تعزل من الاغنام و ووجدت بنسبة 5.3% من الماعز.اظهرت نتائج الفحص البكتيرى التقليدية عزل اربعة معزولات استافيلوكوكس موجبة التلزن بالاضافة الى 37 معزوله استافيلوكوكس سالبة التلزن معتمدا على اختبار التلزن الانبوبى . بينما كانت نتائج اختبار نظام Vitek 2 اكثر دقة فى تصنيف المعزولات الى 3 استافيلوكوكاس اوريوس 38 عترة من استافيلوكوكس سالبة التلزن مقسمة الى 5 استافيلوكوكس لينتس , 7 استافيلوكوكس اوريكيولارز, 14استافيلوكوكاس كروموجينز تشمل عترة من استافيلوكوكاس كروموجينز موجبة التلزن بالاضافة الى4 عترات لكل من استافيلوكوكاس ابيدرميداس, استافيلوكوكاس سيورى و استافيلوكوكاس زيلوزس. ,ومن هنا جاءت نتيجة تحليل التتابع النيوكليوتيدي لجين tufلتعطى القوة الاكبر لتحديد ميكروب الاستافيلوكوكاس كروموجينز القادرة على احداث التلزن للبلازما فى هذة الدراسة بحيث اعطى هذا الجين اعلى نسبة تطابق (8,98%) مع نفس الجين و المعزول سابقا من عترة الاستافيلوكوكاس كروموجينز ATCC4376 الموجودة على بنك الجينات. مما قد يؤكد عملية التصنيف.كما اوضحت نتائج اختبارات الحساسية للمضادات الحيوية عدم وجود مقاومة مطلقة لجميع المضادات الحيوية فى اى من العترات، كما وجد ان نسبة العترات المقاومة لاكثر من 3 أنواع من المضادات الحيوية كانت مرتفعة بين عترات الانتيروكوكاى بالاضافة الى انة تم عزل عترتين لديهم القدرة على مقاومة الفانكوميسين وهم استافيلوكوكس اوريكيوراليز و الانتيروكوكاس فيكاليز وقد تم ملاحظة ان كل عترات الاستافيلوكوكاس اورياس كانت مقاومة للميسيثلين بينما كانت نسبة مقاومتة 92.1%فى الاستافيلوكوكاس سالبة التلزن كما وجد ان هناك عترتين من الاستافيلوكوكاس اورياس المقاومة للميسيثلين كانت احدهما مقاومة للسيبروفلوكساسين و الاخرى مقاومة لحمض الكلافولانيك أموكسيسيلين كانت اعلى نسب المقاومة فى الاستافيلوكوكاس سالبة التلزن للسيفوكستين(92.1 %) و (31.6 %) للسلفا مع التراى ميثوبريم و (10.5 % ) الاريثروميسين.وقد وجد أن جميع عترات الاستافيلوكوكاس كانت حساسة للجينتاميسين(حيث يعتبر الاختيار الانسب لتلقي العلاج)، وفي الوقت نفسه100٪ من عترات الاستافيلوكوكاس سالبة التلزن كانت حساسة للسيبروفلوكساسين و الريفاميسين.في هذه الدراسة تم استخدام أنزيم البلمرة المتسلسل المتعدد للكشف عن وجود بعض من جينات الضراوة مثل جينات fnbA, tst, pvl , bap فى عترتين من الاستافيلوكوكاس اورياس و 5 استافيلوكوكاس سالبة التلزن محل الدراسة و أظهرت النتائج ان fnbA هو الجين الاكثر تواجدا في العترات فقد تواجد في 2/2 من عترات الاستافيلوكوكاس اورياس ومن ثم تواجد فى 4/5 من عترات الاستافيلوكوكاس سالبة التلزن ثم جين tst الذي تواجد في 1/2 عينة من عترات الاستافيلوكوكاس اورياس ومن ثم تواجد فى 2/5 من عترات الاستافيلوكوكاس سالبة التلزن , بينما جينbap الذي تواجد في 1/2 عينة من عترات الاستافيلوكوكاس اورياس ومن ثم تواجد فى 1/5 من عترات الاستافيلوكوكاس سالبة التلزن وجدير بالذكر ان جميع العترات الاستافيلوكوكاس سالبة التلزن التى يوجد بها جينات tst, bap كانت ستاف كروموجينز. بينما لم يتواجد جين ال pvl في اي من المعزولات.فى هذة الدراسة تم عزل عترة من الاستافيلوكوكاس كرموجينز و المصنفة كستافيلوكوكاس سالب التلزن و بالرغم من ذلك كان لها القدرة على احداث التلزن للبلازما وتعد هذة النتيجة التقرير الاول على الاقل فى مصر لعزل هذة العترة و قد تم اجراء اختبار استخدام أنزيم البلمرة المتسلسل المتعدد للكشف عن وجود جين coaوالذى وجد بالفعل فى هذة العترة بالاضافة الى وجود بعض من جينات الضراوة مثل جينات . tst, bap وبالكشف عن جينات المقاومة للمضادات الحيوية وجد جين norA فى الاستاف اورياس المقاومة للسيبروفلوكساسين بالاضافة الى وجود جين vanA المقاومة للفانكومايسين فى عترة الاستاف اوريكيوراليز المقاومة للفانكومايسين ومن هنا يعتبر اللبن الحامل لبكتريا الاستاف وسيلة لإكتساب جينات المقاومة للمضادات الحيوية مما قد يمثل خطورة بالغة على صحة الانسان.وبالتحليل السيرولوجي لعدد 19 عترة من الإيشرشياكولاى أوضحت النتائج أن العترات من نوع O1 و O26 هم الاكثر انتشارا بين المعزولات بنسبة 21.1% وتليها العترات من نوع O148, O114 بنسبة 15.8% لكل منهما وكانت نسبة تواجد O125 هي 10.4% بالاضافة الى 3 عترات غير مصنفة.و بالتحليل الفيلوجيني للعترات المعزولة من الإيشرشياكولاى والكشف عن وجود بعض جينات الضراوة الهامة في احداث العدوي تم تصنيف 5/6 عترات تنتمى الى مجموعة B2بحيث وجد عترة واحدة منهم تحتوى على جين A eae , بينما انتمت عترة واحدة من الست عترات محل الدراسة الى مجموعة A و كانت تحتوى على نفس جين الضراوة A eae . ومن جانب اخر لم يوجد جين CFA/I فى اى من العترات محل الدراسة.كما تمت دراسة قابلية عترات الإشيرشياكولاى لأنماط من المضادات الحيوية المختلفة بطريقة إنتشار القرص, وقد أظهرت النتائج أنه كانت هناك مقاومة مطلقة للإريثرومايسين و الريفاميسين وكذلك لوحظ وجود مقاومة عالية للسيفوكستين بنسبة (94.7%) ويليها للاموكسيسيللين مع الكلافيولينك اسيد( 57.9%) ثم السلفا مع التراى ميثوبريم (26.3%) و للدوكسيسيكلين بنسبة 15.3% , بينما كانت كل معزولات الكليبسيلا مقاومة للإريثرومايسين ، الريفاميسين والكولستين بنسبة (100%). وعلى الجانب الاخر اظهرت نتائج عترات الانتيروبكتر مقاومة مطلقة للإريثرومايسين و الريفاميسين . وعلى العكس من ذلك كانت كل عترات الكوليفورم المعزولة حساسة ل الجينتاميسين , الكوليستين و السيبروفلوكساسين .واشارت هذة الدراسة الى النسب العالية لعزل عترات الكوليفورم متعددة المقاومة للمضادات الحيوية حيث كانت نسب العزل 84.2% فى الاشيرشيا كولاي ، 100% فى كل من الكليبسيلا و الانتيروبكتر.في هذه الدراسة تم استخدام أنزيم البلمرة المتسلسل المتعدد للكشف عن وجود بعض جينات المقاومة للمضدات الحيوية الخاصة بميكروب الاشيرشيا كولاي في 6 عترات من العترات المعزولة وقد أظهرت النتائج ان mph A هو الجين الاكثر تواجدا في العترات فقد تواجد في 4 من المعزولات بحيث اعطى منطقة مميزة عند الوزن الجزيئى403 قاعدة مزدوجة.ثم جين blaCTX الذي تواجد في 2 عينة والتي أعطت منطقة مميزة عند الوزن الجزيئى593 قاعدة مزدوجة مقارنة بالعترة المرجعية.