الفهرس 
IntroductionOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 184 |  |  |
| | | from | 184 | | |
Abstract
تهتم الدراسة الحالية بتحليل اثنا عشر نوعا من الطفيليات باستخدام RAPD-PCR وأربعة بادئات عامة وكذلك خمسة بادئات نوعيه. أيضا تم تحليل البروتين الخلوى لهذه الطفيليات. ولقد تم جمع تلك الطفيليات من عوائل مختلفه من مختلف المناطق فى محافظات القاهره والجيزه والدقهليه. ولقد كانت الطفيليات المستخدمه فى هذه الدراسه وعوائلها وكذلك المناطق المختلفه التى تم جمعها منها كالتالى:
-العائل البرمائى وهو الضفدعه الرقطاء بوفو رجيولارس تم جمعه من مختلف المواقع حول مدينة المنصوره بمحافظة الدقهليه وكذلك من منطقة أبو رواش بمحافظة الجيزه. ولقد وجد أن هذه الضفدعه مصابه طبيعيا ببعض الطفيليات المستخدمه فى الدراسه الحاليه وكانت عباره عن : نوع واحد من ثنائية الجيل وهو ميزوسيليوم موناس, نوع واحد من الشريطيات وهو نيماتوتينيا كشميرينسيس, وثلاثة أنواع من النيماتودا (الخيطيات) وهم نيواكسيسوماتيوم راناى و أبليكتانا مكينتوشى و رابدياس بوفونيس , وأخيرا اليرقه المتكيسه لاحد انواع جنس أكانثوسيفالاس من الطفيليات شوكية الرأس.
-أيضا تم جمع سمكة البقر باجراس بياض من المياه العذبه من فرع دمياط لنهر النيل وروافده او فروعه بالقرب من مدينة المنصوره حيث تم جمع نوعين من الطفيليات ثنائية الجيل منه وهما اكانثوستومم ابسكونديتم و هابلوركويدس كاهيريناس.
-ومن الفار الابيض راتاس راتاس تم جمع احد انواع الديدان الشريطيه وهو هايمينوليبيس دمنيوتا. واخيرا من المجزر الرئيسى بمدينة المنصوره حيث تذبح الابقار والاغنام تم جمع نوعين من الديدان ثنائية الجيل وهما بارامفيستومم ميكربوثيرم وكارميرياس جريجاريس من الابقار ونوع واحد من الديدان الشريطيه هو مونيزيا اكسبانزا من الاغنام.
من ذلك يتضح ان الطفيليات المستخدمه فى هذه الدراسه عباره عن خمسة انواع من الديدان ثنائية الجيل وثلاثة انواع من الشريطيات وثلاثة انواع من الخيطيات ونوع واحد من الديدان شوكية الرأس.
ولقد تم تشريح عينات العوائل المختلفه وجمعت الطفيليات فى اطباق بترى بها محلول ملحى يتراوح تركيزه ما بين 0.6% - 0.9% حيث غسلت عدة مرات بالمحلول الملحى لتخليصها من المخاط والفضلات العالقة بها ولقد فحصت الطفيليات بعد ذلك تحت الميكروسكوب الضوئى لمشاهدة بعض الصفات الخارجية . وكذلك ايضا تم صبغ بعض عينات من كل نوع لفحصها ودراسة شكلها الخارجى للمساعدة فى فصلهم وتعريفهم وكذلك اعدادها للدراسة الجزيئية والتى هى أساس تلك الدراسة ولقد تم استخلاص الحامض النووى الديوٌكسى ريبوزى (DNA) من الطفيليات طبقا لطريقة الجنابى ومارتينيز عام 1997 م باستخدام 200 مجم من كل نوع من انواع الطفيليات التى شملتهم هذه الدراسة . ولقد تم تنقية تكاملية الحامض النووى بواسطة التفريد الكهربى الافقى فى 1% اجاروس جل فى 70 فولت لمدة 60 ( ستون ) دقيقة وتم تقدير كمية ونوعية الحامض النووى باستخدام جهاز سبيكتروفوتوميتر عند معدل طول موجى 260 – 280وتم حساب درجة نقاء الحامض النووى من النسبة 260/280 لقيم الامتصاصية .
فى هذه الدراسة تم استخدام ( RAPD-PCR) للتمييز بين الانثا عشر نوعا من الطفيليات محل الدراسة باستخدام أربع بادئات (ب1 ،ب2 ،ب3 ، ب4 ) . وبعد التفاعل تم تحليل الحامض النووى خلال التفريد الكهربى . أيضا تم استخدام PCR وخمس بادئات نوعية على كل الانواع الانثا عشر وكذلك تم تجزئ البروتين الخلوى لتلك الطفيليات بواسطة SDS–PAGE كمجال أخر للتمييز فيما بينهم . تطبيق ال RAPD-PCR باستخدام أربع بادئات أوضح أن كل جزيئات الحامض النووى فى كل الطفيليات كانت متشابهة ولكن مع وجود اوزان جزيئية مختلفة للروابط فى كل مجموعة من مجموعات الطفيليات الاربع ( ثنائية الجيل –الشريطيات – الخيطيات – شوكية الرأس ) بحيث تتميز كل مجموعة باوزان جزيئية للروابط عن نظيراتها فى المجموعات الاخرى .
ولقد تم استخدام خمس بادئات نوعية (ssu-ty1-f,18s,ITS5/4,ITS4/2,ITS3/4) وتجريبها على منتج الحامض النووى لكل الطفيليات فى هذه الدراسة . واتضح ان النتائج الايجابية كانت على 4 أنواع فقط من تلك الطفيليات . حيث ان البادئيين ITS4/2,ITS3/4 قد أعطوا منتجات الPCR عند 560 ،480 زوج قاعدى مع الطفيلى ثنائى الجيل بارامفستومم ميكروبوثريوم . بينما البادئ الوعى ITS5/4 على الطفيلى ثنائى الجيل كارميرياس جريجارياس قد اعطى منتج ال PCR مع الطفيلى الشريطى مونيزيا اكسبانزا عند 1800 زوج قاعدى وأخيرا فان البادئ النوعى الخامس قد اعطى فقط منتج ال PCR مع الطفيلى الخيطى رابدياس بوفونس عند 1662 زوج قاعدى .
وأخيرا لقد تم استخلاص البروتين الخلوى الكلى من جميع الطفيليات المستخدمة فى هذه الدراسة وتجزيئة بواسطة SDS-PAGE مما نتج عنه نماذج للبروتين بدرجة تشابه عالية . كما أتضح أن كل مجموعة من الطفيليات الاربع لها نموذج نوعى من البروتينات الخلوية . كما تم انشاء دوندجرام يشمل نماذج البروتين للمجموعات الاربع باستخدام قواعد التوصيل البسيطة للتحليل الرقمى وذلك للتمييز بين هذه المعزولات القريبة الشبه بعضها والتى من الممكن أن تساعد فى تعريف أجناس وانواع تلك الطفيليات