الفهرس 
Chapter I : IntroductionOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 146 |  |  |
| | | from | 146 | | |
Abstract
الهدف من هذا العمل كالتالي1.للتعرف علي أوليات الكرش بأنواعها المختلفة الموجودة طبيعيا في كرش الأغنام.2.لدراسة أمكانية حفظ الأوليات الدقيقة الموجودة في كرش الحيوانات المجترة عن طريق التجميد في النيتروجين السائل وإيجاد الطريقة المناسبة لذلك .3.لإنشاء ما يعرف ببنك الأوليات الكرش الذي من الممكن أن يستخدم في علاج حالات عسر الهضم .4.لنشاء محاولة لاستخدام الوليات المحفوظة لتحسين زرع الوليات المهمة للكرش في الغنام التي سبق وتم قتل الوليات بها تجريبيا .لذلك ينقسم هذا العمل إلى تجربتين منفصلتين الأولي هي الحفظ عن طريق التجميد في النيتروجين السائل . والثانية إعادة زراعة الأوليات في كرش الأغنام التي سبق وان ماتت بها الأوليات.المحولة تعد الأولي من نوعها في مصر والشرق الأوسط . التجربة تمت عن طريق التجميد البطيء المتقطع باستخدام بخار النيتروجين وسائل النيتروجين.حفظ وتجميد بروتوزوا الكرش وذلك بهدف :1.سهولة استخدامها في أعادة زراعتها في كرش الحيوانات التي تعانى من عسر هضم.2.سهولة تداولها بين المعامل البحثية للمزيد من الدراسة.3.عمل بنك للبروتوزوا ويعتبر أول بنك في الشرق الأوسط.تم عمل التجربة كالتالي:-اخذ عينات من محتويات الكرش في الأغنام المذبوحة حديثا من المجزر أو عن طريق أنابيب الكرش من الحيوانات الحية قبل الوجبة الصباحية ووضع العينات في عبوات محكمة الغلق حتى الوصول إلي المعمل .تصفية العينة بعصرها في طبقتين من الشاش للحصول على ماء الكرش .توضع الخلاصة في أنابيب محكمة الغلق وتوضع في حمام ماء عند درجة حرارة 39 درجة مئوية حتى يتم ترسيب البروتوزوا في صورة راسب ابيض بعد من 3 إلي 4 ساعات .فحص وعد بروتوزوا الكرش .يتم عد وفحص الأوليات من عينة طازجة في هذه الطريقة يستخدم الشريحة العادية والغطاء الزجاجي العادي والميكروسكوب العادي ويتم عد 1, ملى من عينة مخففة من سائل الكرش.تأقلم أوليات الكرش مع المواد الحافظة .يتم تجهيز المواد المستخدمة في عملية التجميد مثل الجلسرول , والاثيلين جليكول ,والداي ميثيل سلفوكسيد( DMSO ) بتركيزات: 4 , 5 ,6 % .مجموعات أخري تجهز بنفس التركيزات ولكن مضاف إليها 10 % صفا ر البيض .يتم فصل البروتوزوا المترسبة وعزل سائل الكرش و وضعة في الثلاجة عند درجة حرارة - 4 درجة مئوية للاستخدام مرة أخرى .تخلط البروتوزوا بالمواد المساعدة علي الحفظ بتركيزاتها المختلفة ثم يعاد تخفيفها بسوائل الكرش الخالية من البروتوزوا والمفصولة سابقا للتخفيف الطبيعي .يحقن المخلوط بواسطة سرنجة ذات سن واسع في أنابيب سعتها 1/2 مللي .تغلق الأنابيب بالبولي اثيلين بودره بألوان مختلفة لسهولة التمييز .خطوات التجميد والحفظ :الخطوة الأولي :يتم وضع الأنابيب في إناء به ماء بارد مذود بمكعبات الثلج مع متابعة النزول في درجة الحرارة بواسطة ترمومتر حتى تصل إلي 5 درجة مئوية بالتدريج .تعرض الأنابيب 1/2 ملي إلي بخار النيتروجين لمدة 1/2 ساعة وحينها تنزل درجة الحرارة من -5 درجة مئوية إلي – 25 درجة مئوية .بعد نصف ساعة من التعرض إلى بخار النيتروجين يتم غمر الأنابيب سعة (1/2 ) ملى في النيتروجين السائل والذي يخفض درجة الحرارة إلى – 196 درجة مئوية .فحص العينات بعد التجميد .تم فحص عينة من كل تركيز بعد يوم من التجميد والتأكد من نجاح المحاولة ثم بعد ذلك تم الفحص شهريا بانتظام لتسجيل الفروق في حيوية الخلايا بين المواد المستخدمة والتركيزات المختلفة لمدة ستة شهور و تسجيل النتائج .طريقة الفحص :-تفحص العينة باستخدام وحدة فحص مكونة من الاتى .1.حمام ماء درجة حرارته 39 درجة مئوية .2.ميكروسكوب به إمكانية التوصيل بفيديو عرض .3. فيديو عرض موصل بشاشة تليفزيون.4.شرائح زجاجية للفحص ومسخن شرائح.يتم الفحص بأخذ أنبوبة سعة (1/2 مللى ) من تانك الحفظ والتجميد ووضعها في حمام الماء درجة حرارته 39 درجه مئوية لمدة دقيقتين . تقص الأنبوبة من طرفيها ثم توضع قطرة على شريحة زجاجية للفحص . يتم وضع غطاء (cover slide) على الشريحة برفق حتى لا يسمح بوجود فقاعات هوائية . يتم الفحص تحت الميكروسكوب الموصل بفيديو وشاشة عرض .كما يتم حساب نسبة الخلايا الحية المتحركة النشطة إلى الخلايا الميتة أو إلى العدد الطبيعي للخلايا لكل مللى لتر.التجربة الثانية :-والهدف من هذه التجربة هو دراسة أهمية بروتوزوا الكرش للحيوانات المجترة والحالة الصحية للكرش وعملية الهضم والتمثيل الغذائي . وقد أجريت هذه التجربة على ثلاث مجموعات من الأغنام ذات أوزان وأعمار متقاربة واختيرت كلها إناث في عمر 6-8 شهور. كل مجموعة مكونة من ثلاثة .1.المجموعة الأولى الضابطة2.المجموعة الثانية Defaunated اى تم إخلاء الكرش من البروتوزوا ولم يتم إعادة زراعتها مرة أخرى .3.المجموعة الثالثة Refaunated اى تم إخلاء الكرش من البروتوزوا ثم يعاد حقنها بالبروتوزوا مرة أخرى داخل الكرش .عملية :- إخلاء الكرش من البروتوزوا.Defaunation تم إخلاء كرش الأغنام من البروتوزوا وذلك بعزلها عزلا تاما و منع الطعام عنها لمدة 18 ساعة مع تقديم الماء بحرية لها في هذه الفترة ثم تجريع كل حيوان بزيت الطعام بجرعة قدرها 5 ملى /كيلو جرام من وزن الحيوان يفحص الحيوان في اليوم الثاني للتأكد من خلو الكرش من البروتوزوا.عملية :- إعادة زراعة البروتوزوا في الكرش.Refaunatioيتم حقن الحيوان بمحتويات أنبوبة (1/2مللى ) باستخدام سرنجة ذات سن واسع والحقن المباشر داخل الكرش .التجربة :تم عزل المجموعات الثلاثة عزلا تاما مع تقديم الماء النظيف والعلائق بانتظام ثلاث مرات في اليوم وتوحيد الظروف المعيشية .تم اخذ عينات من محتويات الكرش لدراسة ألحمضيةpH) ) ونسبة الامونيا وعدد البروتوزوا في المجموعات المختلفة وكذلك الوزن الدوري للأغنام في المجموعات المختبرة .تم اخذ عينات دم على مانع للتجلط لفحص صورة الدم الكاملة وكذالك عينات أخرى بدون مانع التجلط لفحص كيماويات السيرم وإنزيمات السيرم .التجربة الثالثة .تعريف وتصنيف أوليات الكرش.التعرف على أوليات الكرش تم بعد تثبيتها وصبغها بالمثيل الخضر . التفاصيل الشكلية لكل نوع قورنت بالوصف الذى اعطى من العلمين وليام وسليمان ل entodiniomorphs , holotrichsالنتائج:-أولا في التجربة الأولى بشرت النتائج في التجربة الأولى بنجاح أول محاولة لحفظ وتجميد بروتوزوا الكرش وإمكانية عمل أول بنك لبروتوزوا الكرش في مصر والشرق الأوسط مما يسهل المزيد من الدراسة على الكرش والهضم في الحيوانات المجترة وكان ملخص النتائج كالتالي :-وجد أن حيوية الخلايا في الأنابيب المستخدم معها أل DMSO هي أفضل النتائج . وان الأنابيب المستخدم معها الجليسرول هي اقل النتائج .كما وجد أن أل DMSO ( 5 %) هو أفضل التركيزات.كما أتضح أن إضافة مح البيض (صفار البيض) لم تؤثر تأثيرا معنويا بالزيادة أو النقص على حيوية الخلايا المجمدة .النتيجة في التجربة الثانية :-وجد من خلال التجربة أن معدلات النمو في المجموعة الضابطة والمجموعة ألمعاد زراعة البروتوزوا بها Refaunated كانت أعلى من المجموعة الثانية التي تم إخلاء البروتوزوا منها Defaunated وكذلك الحالة الصحية العامة وحالة الصوف أفضل من المجموعة الثانية .كما وجد أن درجة الحمضية للكرش أعلى منها في المجموعة الثانية. كما وجد أن نسبة الامونيا في للكرش أعلى في مجموعة الكنترول ومجموعة أل Refaunated عنها في المجموعة الثانية .أوضحت نتائج صورة الدم وتشمل عدد كرات الدم الحمراء ومحتوى الهيموجلوبين والهيماتوكريت وكذلك عدد خلايا الدم البيضاء الكلى والتفريقى الى عدم وجود فروق معنوية بين المجموعة الضابطة و المجموعتين الأخريين. كذلك اشارت التحاليل البيو كيميائية لمصل الدم وتشمل اليوريا والكرياتينين والكالسيوم والفسفور غير العضوى والصوديوم والبوتاسيوم وخميرة الألانين امينوترانسفيراز وخميرة الأسبرتات امينوترانسفيراز وخميرة الفوسفات القاعدى الى عدم وجود فروق معنوية بين المجموعة الضابطة عن المجموعتين الأخريين.النتيجة في التجربة الثالثة .التصنيف الظاهري والشكلي للبروتوزوا أوضح الأنواع التي تم تصنيفها وتشمل على ما يلي :- 1-Diplodinium species (D. dentatum and D. rostatum).2-Isotricha species (I. intestinalis and I. prostoma).3-Entodinium species (E. bursa, E. caudatum and E. simplex).4-Eudiplodinium neglectum 5-Daystrichia ruminantum 6-Polyplastrom multivesiculatumأتضح من الدراسة أهمية بروتوزوا الكرش للحيوانات المجترة في تحسين عمليات الهضم والتمثيل الغذائي للألياف والسيليلوز وضبط عمليات هضم الدهون والنشويات وحماية الكرش من زيادة الحمضية وأثارها السيئة على كفاءة الهضم في الحيوان ويرجح أن زيادة معدلات النمو تعود لوجود البروتوزوا بصورة طبيعية في كرش الحيوان .ينصح الباحث بالاستفادة من عمل بنك البروتوزوا في الاتى .سهولة تداولها بين المعامل للأغراض البحثية .استخدامها في علاج الآثار الناتجة عن اللكمة والنفاخ وعلاج عسر الهضم في الحيوانات المجترة .إعادة زراعتها في كرش الحيوانات التي تعزل مبكرا وهى صغيرة عن أمهاتها في مزارع إنتاج اللبن .إعادة تصنيفها وتقسيمها وحصر الأنواع الموجودة في مصر وتقييم أهمية كل نوع على حدة.